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轉(zhuǎn)染效率低?這份細胞轉(zhuǎn)染攻略,快收藏了吧!

更新時間:2024-01-29

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01 細胞轉(zhuǎn)染的分類


從導(dǎo)入的核酸存在于宿主細胞的時間長短,可將轉(zhuǎn)染分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。

瞬時轉(zhuǎn)染(transient transfection):指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過某種方式導(dǎo)入到哺乳動物細胞內(nèi),該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細胞自身的基因組上。瞬時轉(zhuǎn)染的基因表達是快速且短暫的,通常只能維持幾天。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于快速檢測基因功能或蛋白質(zhì)表達,例如了解基因沉默、抑制性RNA和小規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)等。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(Stable transfected):將外源DNA整合到宿主細胞的基因組中,這種整合過程需要更長時間和更復(fù)雜的操作。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的基因表達是長期且穩(wěn)定的,因為外源基因會被傳遞給子代細胞。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于長期表達目標基因的實驗,例如生產(chǎn)重組蛋白、進行基因敲除或敲入等研究。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染也用于藥物篩選、研究形態(tài)變化、抗生素耐藥性等領(lǐng)域。

細胞轉(zhuǎn)染通常可分為三類途徑分別為物理介導(dǎo)、化學介導(dǎo)和生物介導(dǎo)。

物理介導(dǎo):電穿孔法、顯微注射和基因槍等

化學介導(dǎo):如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)技術(shù)等

生物介導(dǎo):病毒介導(dǎo),逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒等


問題來了,該怎么選擇合適的轉(zhuǎn)染方法呢?

小編對這三個途徑的常用方法進行了總結(jié),記得給小編點個收藏hahaha~


物理介導(dǎo)——電穿孔法

原理:電流能夠擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi)。

優(yōu)點:原理簡單;不需要載體。

缺點:需要特殊設(shè)備,電流對細胞傷害非常大。


化學介導(dǎo)——脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染

原理:陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,與核酸的磷酸根通過靜電作用,將DNA分子進行包裹,形成DNA脂復(fù)合物,能被表面帶負電的細胞膜吸附,再通過細胞內(nèi)吞進入細胞。

優(yōu)點:操作比較簡單,轉(zhuǎn)染效率高。

缺點:需要進行條件優(yōu)化;有些細胞體系不易轉(zhuǎn)染;對血清敏感;價格較高。


化學介導(dǎo)——陽離子聚合物

原理:與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染原理相似,都是利用陽離子與核酸結(jié)合成復(fù)合物,利用細胞內(nèi)吞進入細胞內(nèi)。

優(yōu)點:在血清內(nèi)穩(wěn)定;對細胞毒性相對較低;轉(zhuǎn)染率高;性價比高。

缺點:需要對體系進行條件優(yōu)化;有些細胞體系不易轉(zhuǎn)染。


生物介導(dǎo)——病毒感染

原理:通過侵染宿主細胞從而將外源基因?qū)氲郊毎小?/p>

優(yōu)點:高轉(zhuǎn)染率;適用性廣。

缺點:需要對體系進行條件優(yōu)化;需要構(gòu)建病毒載體,步驟較為復(fù)雜。


然而,一種方法不會適用于所有的細胞和實驗,理想的轉(zhuǎn)染方法應(yīng)該根據(jù)自己的細胞類型和實驗需求來選擇。合適的細胞轉(zhuǎn)染方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率,低細胞毒性對正常生理學的影響最小,且易于使用可重復(fù)性等特點。





02 在轉(zhuǎn)染過程中的注意事項

細胞轉(zhuǎn)染效率往往受到很多因素的影響,從細胞類型、細胞培養(yǎng)條件和細胞生長狀態(tài),到轉(zhuǎn)染方法的操作細節(jié),都需要考慮,所以細胞轉(zhuǎn)染是一個常規(guī)但并不簡單的實驗。在進行轉(zhuǎn)染實驗時,需要注意以下事項:

細胞狀態(tài):確保細胞處于良好的生長狀態(tài),并在轉(zhuǎn)染前處于指數(shù)生長期。

轉(zhuǎn)染試劑選擇:根據(jù)細胞類型和實驗?zāi)康倪x擇適當?shù)霓D(zhuǎn)染試劑。

DNA/RNA質(zhì)量:使用高質(zhì)量的DNA或RNA,并確保其大小適宜。

轉(zhuǎn)染時間:根據(jù)細胞類型和轉(zhuǎn)染試劑確定最佳的轉(zhuǎn)染時間。

健康細胞培養(yǎng)物和操作:保持細胞健康,避免RNA酶和其他污染源的污染。

純化RNA:在轉(zhuǎn)染前,使用適當?shù)姆椒兓疪NA,以去除多余的核苷酸、小的寡核苷酸、蛋白和鹽離子。

避免RNA酶污染:確保實驗環(huán)境中沒有RNA酶,防止對實驗結(jié)果產(chǎn)生影響。

重復(fù)實驗:為了確保實驗結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性,需要進行多次重復(fù)實驗。

轉(zhuǎn)染效率檢測:轉(zhuǎn)染完成后需要對轉(zhuǎn)染效率進行檢測,對實驗數(shù)據(jù)進行正確的分析和解釋,避免因誤判而得出錯誤的結(jié)論。


說到這里,小編給大家推薦一款轉(zhuǎn)染試劑,那就是——Invitrogen的Lipofectamine™ 3000轉(zhuǎn)染試劑。

Lipofectamine™ 3000轉(zhuǎn)染試劑采用先進的脂肪納米微粒技術(shù),實現(xiàn)了*轉(zhuǎn)染性能。對于多種難轉(zhuǎn)染和常見的細胞(例如 HEK293、HeLa),該試劑在保證轉(zhuǎn)染效率的同時也提高了細胞存活率。

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Lipofectamine™ 3000轉(zhuǎn)染試劑專門針對難轉(zhuǎn)染的細胞種類進行了優(yōu)化,能夠為廣泛的細胞種類提供越的轉(zhuǎn)染性能。其可高效轉(zhuǎn)染的細胞類型包括:

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包裝規(guī)格

L3000001

0.1 mL

L3000008

0.75 mL

L3000015

1.5 mL

L3000075

5x1.5 mL

L3000150

15 mL

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