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NEB E6300S cDNA第一鏈合成試劑盒 逆轉(zhuǎn)錄

簡要描述:產(chǎn)品名稱:NEB E6300S cDNA第一鏈合成試劑盒 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):E6300
產(chǎn)品品牌:NEB (New England Biolabs)
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  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時(shí)間:2024-09-05
  • 訪  問  量:828
詳細(xì)介紹
品牌其他品牌貨號(hào)E6300S
供貨周期現(xiàn)貨主要用途cDNA合成
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),綜合

產(chǎn)品名稱:NEB E6300S cDNA第一鏈合成試劑盒 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào):E6300

產(chǎn)品品牌:NEB (New England Biolabs)

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NEB E6300S cDNA第一鏈合成試劑盒 逆轉(zhuǎn)錄

ProtoScript® cDNA 第一鏈合成試劑盒含兩種經(jīng)優(yōu)化的混合液:M-MuLV 酶混合液和 M-MuLV 反應(yīng)混合液。M-MuLV 酶混合液含 M-MuLV 反轉(zhuǎn)錄酶和小鼠 RNase 抑制劑,M-MuLV 反應(yīng)混合液含 dNTP 和經(jīng)優(yōu)化的緩沖液。該試劑盒還包含兩種優(yōu)化的反轉(zhuǎn)錄引物和無核酸酶水。錨定的 Oligo-dT 引物 [d(T)23VN] 迫使引物與 polyA 尾的起始端退火。經(jīng)優(yōu)化的隨機(jī)引物混合液能隨機(jī)并持續(xù)性地與整個(gè) RNA 模板配對(duì),包括 mRNA 和無 polyA 尾的 RNA。合成的第一鏈 cDNA 產(chǎn)物長度可超過 10 kb


成功合成 cDNA 的要素:

RNA 模板
高純度的完整 RNA 對(duì)于靈敏的 RT-PCR 檢測至關(guān)重要。RNA 的 A260/A280 比值應(yīng)至少 1.7 或更高。

總 RNA 或 mRNA 均可用于反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。總 RNA 通常足以進(jìn)行大多數(shù) RT-PCR 分析。不過,如果需要,可以使用 PolyA Spin mRNA 分離試劑盒(NEB #S1560)或 mRNA 磁性分離試劑盒(NEB #S1550)獲得 mRNA。

檢測所需的 RNA 量取決于目標(biāo)轉(zhuǎn)錄本的豐度。通常推薦使用 1 ng 至 1 μg 的總 RNA 或 0.1-100 ng 的 mRNA。

cDNA 第一鏈合成反應(yīng)
RNA 和引物在 70℃ 條件下變性 5 分鐘,可以去除阻礙較長 cDNA 合成的二級(jí)結(jié)構(gòu)。不過,可以在某些情況下省略此步驟(結(jié)果未發(fā)表)。

推薦在 42℃ 條件下溫育一小時(shí),以獲得最高產(chǎn)量和最大長度。不過,許多靶標(biāo)用較短的溫育時(shí)間即可進(jìn)行檢測。例如,對(duì)于 2 kb cDNA 合成,溫育 5 分鐘就足夠了。

選擇反轉(zhuǎn)錄引物
Oligo d(T) 引物是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的首·選,因?yàn)樗_保所有 cDNA 拷貝在 mRNA 的 3′ 端終止并產(chǎn)生最長的連續(xù) cDNA。錨定的 Oligo-dT 引物 [d(T)23VN] 迫使引物與 polyA 尾的起始端退火,從而防止在 polyA 尾的內(nèi)部位點(diǎn)開始退火(1)。不過,如果需要,也可以選擇另外兩種引物。

隨機(jī)引物混合液是經(jīng)優(yōu)化的六聚體和 d(T)23VN 引物混合液。該混合液能隨機(jī)地與整個(gè) RNA 模板配對(duì),包括 mRNA 和無 polyA 尾的 RNA(例如核糖體 RNA)。隨機(jī)引物混合液產(chǎn)生的 cDNA 平均長度較短,可用于檢測多個(gè)短 RT-PCR 產(chǎn)物。隨機(jī)引物混合液在各種 RNA 模板中均具有良好的性能。

基因特異引物用于 cDNA 合成反應(yīng)時(shí),cDNA 產(chǎn)物只能用于擴(kuò)增該轉(zhuǎn)錄本。RNA 起始量較低(低于 10 ng)且只需要一種特定的 cDNA 時(shí),使用這種方法可以獲得良好的結(jié)果。

推薦的引物濃度:
引物:終濃度
OLIGO d(T)23VN:5 μM
隨機(jī)引物混合液:6 μM
特異引物:0.1–1 μM


產(chǎn)品名稱:NEB E6300S cDNA第一鏈合成試劑盒 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào):E6300

產(chǎn)品品牌:NEB (New England Biolabs)

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相關(guān)產(chǎn)品推薦:

  • NEB M0277S RNase Inhibitor, Murine: 用于保護(hù)RNA免受降解,提高逆轉(zhuǎn)錄效率。

  • NEB N0447S DNA Ladder Mix: 用于電泳分析的標(biāo)準(zhǔn)分子量對(duì)照,確保片段大小判斷準(zhǔn)確。

  • NEB M0314S RNase H: 在cDNA合成后消除RNA,增強(qiáng)后續(xù)反應(yīng)效果。

訂購消息:
現(xiàn)在即可通過NEB授權(quán)代理商華雅思創(chuàng)生物進(jìn)行訂購,買試劑,找華雅,華雅思創(chuàng)生物提供上千種生物試劑耗材。


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