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流式細(xì)胞儀的調(diào)試和校準(zhǔn)方法

更新時(shí)間:2023-02-22

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   流式細(xì)胞儀是一種用于分析細(xì)胞的技術(shù),包括細(xì)胞計(jì)數(shù)、表型、細(xì)胞周期評(píng)估和生存能力。流式細(xì)胞儀中激光器產(chǎn)生的光被樣品中的細(xì)胞散射,由檢測(cè)器測(cè)量,然后轉(zhuǎn)化為可分析和測(cè)量的信號(hào)。
  調(diào)試和校準(zhǔn)
  流式細(xì)胞儀在使用前,甚至在使用過程中都要精心進(jìn)行調(diào)試,以保證工作的可靠性和最佳性。調(diào)試的項(xiàng)目主要是激光強(qiáng)度、液流速度和測(cè)量區(qū)的光路等。
  激光強(qiáng)度:除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長(zhǎng)的激光出光外,還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強(qiáng)度輸出為最大。
  液流速度:可通過操作臺(tái)數(shù)字顯示監(jiān)督,調(diào)節(jié) 氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。
  測(cè)量區(qū)光路調(diào)節(jié)?。哼@是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測(cè)量區(qū)的液流、激光束、90散射測(cè)量光電系統(tǒng)垂直正交,而且交點(diǎn)較小。一般可在用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球等校準(zhǔn)中完成。
  流式細(xì)胞術(shù)中所測(cè)得的量是相對(duì)值,因此需要在使用前或使用中對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)或標(biāo)定,這樣才能通過相對(duì)測(cè)量獲得絕對(duì)的意義。因而FCM中的校準(zhǔn)具有雙重功能:儀器的準(zhǔn)直調(diào)整和定量標(biāo)度。標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)該穩(wěn)定,有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形,樣品分散性能良好,且經(jīng)濟(jì)、容易獲得。常用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球作為非生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品,雞血紅細(xì)胞做為生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品。微球用樹脂材料制作,或標(biāo)有熒光素,或不標(biāo)記熒光素。所用的雞血紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4),經(jīng)PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細(xì)胞混合,室溫下振蕩醛化24h,最后經(jīng)PBS再清洗,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因?yàn)槲唇?jīng)熒光染色,所測(cè)光信號(hào)為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光。
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