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分享重組人纖粘連蛋白片段包被培養(yǎng)板的制備

更新時(shí)間:2022-10-17

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將重組人纖粘連蛋白片段包被于培養(yǎng)板上,濃度20-100μg/ml的重組人纖粘連蛋白片段可達(dá)到4-20μg/cm2的包被密度。  
1.包被前,用無菌PBS將該溶液稀釋至20-100μg/ml?!菊?qǐng)?zhí)崆坝?jì)算重組人纖粘連蛋白試劑的用量,如:2.25ml濃度為20μg/ml的重組人纖粘連蛋白溶液放入直徑為35mm的培養(yǎng)皿(9cm2)中時(shí),用于包被的密度為5μg/cm2】  
注意:為避免重組人纖粘連蛋白片段丟失,請(qǐng)勿將PBS稀釋的重組人纖粘連蛋白溶液過濾除菌。  
2.將適當(dāng)體積(24孔板中每孔0.5ml,或6孔板每孔2ml。)的無菌重組人纖粘連蛋白溶液分配到每個(gè)板中,讓板在室溫下靜置2小時(shí)或在4℃過夜。  
注意:在此步驟中應(yīng)使用未經(jīng)處理的細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)組織培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿。  
3.移除重組人纖粘連蛋白溶液,然后用適量含無菌2%牛血清白蛋白(BSA,F(xiàn)ractionV)的PBS溶液進(jìn)行封閉(24孔板中每孔0.5ml,或6孔板每孔2ml),讓板在室溫下靜置30分鐘。  
4.移除BSA溶液,用適當(dāng)體積的HBSS/Hepes或PBS清洗一次。除去洗滌液后,即可使用。重組人纖粘連蛋白片段包被板可用封板膜密封,并在4℃下儲(chǔ)存—周。
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